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365bet生物:ELISA试剂盒实验中常见问题剖析
发布时间:2020-02-10   点击次数:33次

Q1.标曲不显色或显色很弱,样本显色:
溶解标准品以及倍比稀释时,未涡旋轰动或不可充沛。
标准品溶解、倍比稀释时均需求涡旋轰动以保证充沛混匀。单纯依托移液器重复吹打,效率较低、效果也不必定jia。
Q2.样本经不同梯度稀释,ELISA试剂盒核算得到的样本值差异较大:
有时分咱们不清楚样本中目的蛋白的浓度怎样,应该怎样稀释,那么咱们就会做下预实验,确认稀释倍数。但是有时分同一样本做了几个不同梯度稀释后,核算得到的样本值之间差异较大。
Q3.本底偏高:
样本值测不到标曲的本底即Blank孔的OD值一般要求控制在0.1以下(关于高敏ELISA可以恰当放宽要求)。尤其是样本值特别低的时分,本底过高会掩盖目的信号,导致无法测到样本值。在参加TMB显色后,需实时观察标曲显se情况。通常在S5孔有肉眼可见的弱小蓝色,即可中止反应。
Q4.标曲显色,样本不显色:
当样本中目的蛋白浓度极低或者样本中搅扰要素较强,就无法检测到。现在ELISA试剂盒仍然是蛋白检测活络度gao的方法,与不同技能结合后,衍生出了多种类型的ELISA,提高了检测活络度。
Q5.不同试剂盒中的组分能否通用:
除非是共用的试剂如洗液、检测缓冲液,其它组分不主张用其它试剂盒的组分,乃至是同一目标不同批次的试剂盒里的组分。这些组分(包含标准品、标准品稀释液、检测抗体、酶等)都是经过优化的,假如轻率运用其它试剂盒的组分,有或许对效果产生影响。

 

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